Loles León se trasladó de Cataluña a Madrid para emprender una carrera como intérprete. En plena movida madrileña conoce a Pedro Almodóvar, quien le ofrece sendos papeles en Mujeres al borde de un ataque de nervios (1987) y ¡Átame! (1989).
Posteriormente, Loles León trabaja con Vicente Aranda en papeles de reparto en los filmes El amante bilingüe (1993) y Libertarias (1996).
En 1997 actúa como protagonista en la película Amor de hombre y en 1998 rueda La niña de tus ojos, en la que encarnó a una empleada de hogar que, al final de una experiencia traumática en la Alemania nazi, decide ser revolucionaria. Al año siguiente fue candidata al Premio Goya a la mejor interpretación femenina de reparto.
En 2003 empezó a trabajar en Aquí no hay quien viva y en 2004 protagonizó el primer cortometraje de Julián Quintanilla, Implicación, lo que le valió el Premio a la Mejor Actriz en el Festival de Cine de Girona.
En 2007 presentó en el parque Santa Catalina la Gala Drag Queen de Las Palmas de Gran Canaria y trabajó en la serie Fuera de control, coprotagonizada por Amparo Larrañaga.
También ha participado en la segunda parte de la serie de televisión Manos a la obra, en la que actúa en el papel de Milagros, gobernanta del hotel.
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